星空体育官方网站首页的一些篩選事項為您解讀

　　1.由於基因轉染到細胞內之後要一段時間才能表達出蛋白質。所以星空体育官方网站首页篩選時不能太早;但是也不能太晚，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒，終導致篩選不出陽性克隆，一般要在轉染24小時之後才開始加篩選。隨著細胞的代謝，濃度和活性都會下降，所以每3-5天都要更換一次篩選液。

　　2.加抗生素的時機，主要是考慮插入到細胞基因組的抗性基因是否已經得到表達。一般是轉染48小時後加入抗生素。挑出單克隆後就可以用維持濃度，一般是穩定星空体育官方网站首页篩選濃度的1/2。

　　關於維持濃度，有人說細胞會出現對抗生素的抗性，應不斷提高其濃度。而且如果要挑選幾個陽性克隆中較高表達的克隆的話，可以調整抗生素的濃度。當然，抗性基因高表達，目的基因不一定就跟著高表達。

　　此外，也需穩定細胞係構建培養液：

　　加藥篩選穩定星空体育官方网站首页約6天左右，細胞會大量死亡，孔中隻剩下的細胞*。這時會出現：

　　1.死亡的細胞會裂解釋放出有害物質，導致那些有表達陽性細胞死亡，即非選擇性死亡，因此要及時換液。

　　2.孔中細胞數目很少，細胞之間的信號會變得很弱，也會導致陽性細胞的狀態不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養液，再轉染後篩選穩轉星空体育官方网站首页過程中就可以應用這種培養基。

　　3.適當增加血清濃度。

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