【連載-企業參考品】乳腺癌的PCR和NGS參考品的選擇

科佰生物作為(wei) 一家提供企業(ye) 核酸診斷標準品的企業(ye) ，在該領域已經深耕多年，與(yu) 全國該領域90%的企業(ye) 都有過合作，成功支持過很多企業(ye) 的試劑盒研發和獲批，在該領域有豐(feng) 富的經驗。根據我們(men) 對市場的調研，對客戶需求的理解，我們(men) 把我們(men) 的產(chan) 品線劃分為(wei) 多個(ge) 模塊，主要為(wei) 支持PCR的單點mutation、fusion和CNV產(chan) 品，支持NGS的小panel和大panel(泛腫瘤、包含TMB和MSI)產(chan) 品，支持IHC和Fish的FFPE block產(chan) 品，支持標準品定標的dPCR檢測試劑盒產(chan) 品等。

接下來的幾期，我們(men) 陸續會(hui) 針對不用的腫瘤，遵循NCCN指南的標注，為(wei) 大家分享我們(men) 對企業(ye) 參考品選擇的看法。

乳腺癌是影響女性健康的主要的惡性腫瘤之一。根據 Globalcan2012數據，2012年女性乳腺癌新發病例約167.1萬(wan) ，標化發病率為(wei) 43.1/10萬(wan) ，位居女性惡性腫瘤發病*。

女性乳腺癌發病和死亡分別位居我國女性惡性腫瘤發病和死亡的第1位和第5位，全國2014年女性乳腺新發病例約27.89萬(wan) 例,占女性惡性腫瘤發病的16.51%，全國2014年女性乳腺癌死亡病例約6.60萬(wan) 例,占女性惡性腫瘤死亡的7.82%。

根據NCCN指南描述，乳腺癌主要區分非浸潤性乳腺癌和浸潤性乳腺癌，涉及的分子標記物主要為(wei) estrogen receptor (ER)，progesterone receptor (PR)，Her-2，BRCA1/2，多基因檢測。對應的臨(lin) 床意義(yi) 和指導，請點擊下載NCCN指南。

如下我們(men) 開始對每個(ge) 分子標誌物做一些分析。

ER、PR、HER-2分子標記物

臨(lin) 床的診療，一般是先看激素受體(ti) 的狀態，也就是ER和PR的檢測，再看HER2的檢測，結合淋巴結轉移判斷，製訂治療方案。

ER、PR、HER2的檢測，一般是采用IHC和Fish檢測，其中ER和PR一般定性判斷，選擇IHC，HER的檢測可以定性和定量，具體(ti) 檢測原則為(wei) ：

針對HER2的IHC檢測，臨(lin) 床檢測有明確的評分標準，科佰生物推出的IHC Reference Standard，主要為(wei) 陰性對照和陽性對照，用於(yu) 監控IHC整個(ge) 實驗的過程。

HER2的Fish檢測也是基於(yu) 切片，是對細胞中拷貝數的一個(ge) 檢測，科佰生物選擇ddPCR的方法，按照NIST的標準，選擇內(nei) 參基因DCK，EIF5B和RPS27A，對不同的標準品，進行定標，對應的標準品為(wei) ：

BRCA1/2相關(guan) 的標準品HER-2分子標記物

BRCA1/2編碼的BRCA是HR（homologous recombination，HR）途徑的關(guan) 鍵蛋白之一，臨(lin) 床檢測到BRCA1/2的Germline mutation，可以選擇用PARP抑製劑治療，尤其是HER2陰性的患者。BRCA蛋白的功能缺失會(hui) 導致HR途徑無法正常運行，腫瘤細胞會(hui) 啟用非同源末端修複係統，導致基因修複錯誤，不斷積累後導致細胞死亡。

 科佰生物推出4款BRCA1/2相關(guan) 的標準品：

以CBP9003為(wei) 例，對應的位點為(wei) ：

HRR和HRD分子標誌物

另外近的臨(lin) 床研究表明，PARP抑製劑同樣也適用另外2類標記物的診斷，一類是HRD的檢測患者，一類是HR通路的其他基因突變，都已經在臨(lin) 床實驗中被使用，相信未來會(hui) 逐步會(hui) 寫(xie) 入NCNN指南。

科佰生物也陸續會(hui) 上新HR-Related Gene(CBP90021)和HRD(CBP90022)類的標準品。

多基因檢測

後一類是用於(yu) 考慮向輔助內(nei) 分泌治療中添加輔助全身化療的多基因檢測，通過複發風險計分，幫助做出治療指證，其中的優(you) 先級是Oncotype Dx的21基因檢測，國內(nei) 也有很多公司開展了這樣的檢測。

乳腺癌21基因檢測（Oncotype DX）是采用RT-PCR方法，檢測21個(ge) 與(yu) 乳腺癌細胞增殖、侵襲、Her-2、激素等相關(guan) 的基因的表達量，通過算法進行複發評分（RS），根據評分值指導ER/PR+、HER2-和淋巴結陰性早期乳腺癌患者術後的預後判斷和治療決(jue) 策。

 對應的計算方式為(wei) ：RS=+ 0.47 x Her-2 Group Score - 0.34 x ER Group Score + 1.04 x Proliferation Group Score + 0.10 x Invasion Group Score + 0.05 x CD68 – 0.08 x GSTM1 -0.07 x BAG1

 科佰生物應用Oncotype DX的方法，製備出幾個(ge) 低風險（RS<26）、中風險(RS26-30)、高風險(RS>30)的標準品，即將上線，歡迎大家來詢。

 綜上，按照NCCN的指南，按照臨(lin) 床的藥物，按照伴隨診斷的需求，科佰生物開發了針對乳腺癌的多種診斷參考品，滿足不同客戶的需求。

 標準品選擇好了，接下來就是做性能評價(jia) ，讓我們(men) 先學習(xi) 下指導原則，對於(yu) 性能評價(jia) 的規定。

 詳見。