【靶點模型+診斷質控】BTK C481S的藥物開發和診斷

Bruton's tyrosine kinase（簡稱BTK），是一種BTK基因編碼的酪氨酸激酶。BTK包含5個(ge) 不同的蛋白質相互作用域，包括氨基末端pleckstrin同源（PH）結構域、富含脯氨酸的TEC同源（TH）結構域、SRC同源（SH）結構域SH2和SH3，以及具有激酶活性的結構域。
 

Fig 1. BTK的結構域


信號通路
 

BTK在B細胞發育中起著至關(guan) 重要的作用，因為(wei) 它是從(cong) 免疫球蛋白重鏈成功重排後形成的前B細胞受體(ti) 傳(chuan) 遞信號所必需的，它還通過高親(qin) 和力IgE受體(ti) 在肥大細胞活化中起作用。BCR激活觸發信號小體(ti) 的形成，其中包括蛋白酪氨酸激酶LYN、SYK和BTK，以及磷脂酶Cγ2和磷酸肌醇3-激酶。在信號小體(ti) 內(nei) ，BTK被LYN和SYK磷酸化。SYK和BTK隨後磷酸化磷脂酶Cγ2，導致鈣動員，激活ERK、AKT和核因子-κB，隨後導致細胞存活、細胞增殖、分化和抗體(ti) 產(chan) 生。

Fig 2. BTK涉及的信號通路


BTK的抑製劑
 

BTK在許多B細胞白血病和淋巴瘤中表達，早在1999年，第一個(ge) 合理設計的BTK的小分子抑製劑（LFM-A13）在體(ti) 外被證明具有抗白血病活性，隨後更多的具有選擇性的BTK抑製劑，包括不可逆抑製劑依魯替尼（也稱為(wei) PCI-32765）陸續被開發出來。依魯替尼用於(yu) 證明BTK參與(yu) 致癌BCR信號傳(chuan) 導，該信號傳(chuan) 導控製彌漫性大B細胞淋巴瘤 (ABC-DLBCL)的人類活化B細胞樣亞(ya) 型的存活。依魯替尼單藥治療在II期試驗中顯示出對慢性淋巴細胞白血病(CLL) 和套細胞淋巴瘤(MCL)患者的令人鼓舞的臨(lin) 床活性。因此，依魯替尼獲得突破性認定，並於(yu) 2013年被美國食品和藥物管理局 (FDA) 批準用於(yu) 治療複發性 MCL。
 

Fig 3. 常見靶向B細胞腫瘤的BTK小分子抑製劑
 

依魯替尼是一種口服抑製劑，可與(yu) BTK的半胱氨酸481共價(jia) 結合，在臨(lin) 床上發現依魯替尼治療後進展的CLL患者中出現BTK C481S的突變，破壞了依魯替尼和BTK的共價(jia) 結合，降低了對BTK酶活的抑製，因此第二代非共價(jia) 的BTK抑製劑，不需要與(yu) C481結合，同時最近很火的針對BTK的抑製劑，當屬於(yu) BTK-PROTAC了。

Fig 4. 常見靶向BTK的PROTAC的分子


BTK C481S的診斷
 

BTK C481S的檢測，直接影響依魯替尼的治療方案，因此在臨(lin) 床上不管是什麽(me) 方法，都是需要對這個(ge) 位點做檢測的。

標準品
 

科佰生物作為(wei) 一家專(zhuan) 業(ye) 提供分子診斷標準品的公司，提供針對BTK C481S多種形式的產(chan) 品（gDNA、ctDNA、FFPE等等），涉及多種技術平台，對整個(ge) 流程做質控管理，也適合LDT和IVD的開發驗證。

表1. BTK C481S的分子診斷標準品


 部分數據展示 




Fig 5. Sanger sequencing of BTK C481S for DNA


藥物靶點模型

 

針對BTK C481S的藥靶模型，在cell-based assay層麵，我們(men) 構建了基於(yu) BTK C481S驅動的baf3的模型，可以用於(yu) 篩選針對C481S耐藥的小分子、大分子；同時也構建了過表達BTK的穩定星空体育官方网站首页，可以用於(yu) PROTAC技術。

表2. Cell-based assay of BTK include anti-proliferation and PROTAC

 部分數據展示 

Fig 6. Sanger sequencing of BTK C481S for RNA