熱門CTLA4&PD1/L1雙靶點抗體活性檢測細胞模型

T細胞在癌症、感染和自身免疫性疾病相關(guan) 的不同類型的免疫反應中都發揮著至關(guan) 重要的作用。T細胞與(yu) 抗原呈遞細胞的特異性相互作用往往決(jue) 定了T細胞的命運並調節其抗腫瘤反應。基礎及臨(lin) 床研究發現了許多調節T細胞功能的免疫調節分子，其中，表達在T細胞上的免疫檢查點分子通過激活信號（共刺激分子）或抑製信號（共抑製分子）調節T細胞功能，在免疫係統中起著核心作用。目前，靶向T細胞功能的免疫檢查點抗體(ti) 療法已經獲得了激動人心的療效，取得了很大的成功，其中包括針對程序性細胞死亡蛋白1（PD-1）及其配體(ti) PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗細胞毒性T淋巴細胞相關(guan) 蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等單抗藥物已廣泛運用於(yu) 黑色素瘤、轉移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各種腫瘤患者。

在迄今發現的免疫檢查點分子中，CTLA-4抑製T細胞的作用機製是為(wei) 人們(men) 最深入了解的機製之一。CTLA-4，又稱CD152，是一種跨膜糖蛋白，可與(yu) CD28競爭(zheng) 性地結合抗原呈遞細胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，當與(yu) 配體(ti) 結合時，可作為(wei) T細胞激活的“關(guan) 閉”開關(guan) ，針對CTLA4的單抗Ipilimumab是一個(ge) 被成功用於(yu) 黑色素瘤患者的免疫檢查點藥物。

PD-1（也稱為(wei) CD279），是一種T細胞表麵受體(ti) ，通過與(yu) 配體(ti) 其PD-L1和PD-L2的相互作用對抑製T細胞活性起著重要作用。與(yu) CTLA-4信號類似，PD-1結合其配體(ti) 抑製T細胞增殖，細胞因子如幹擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子和白細胞介素2（IL-2）的產(chan) 生，並減少T細胞的存活，但與(yu) CTLA-4不同的是，它主要調節組織和腫瘤內(nei) 的效應T細胞活性，而不影響淋巴器官中的T細胞活化。

藥物研發現狀

盡管通過抗體(ti) 藥物對免疫檢查點信號阻斷在癌症治療中取得了顯著的成功，但目前，大多數患者仍不能從(cong) 單一靶點的阻斷中獲益。例如，雖然臨(lin) 床上針對PD-1和CTLA-4通路的抗體(ti) 藥物，已被用於(yu) 多種癌症適應症，但大多數患者單一使用PD-1或CTLA-4阻斷劑並無效果。因此，針對一種以上的免疫檢查點抗原的抗體(ti) 組合療法被認為(wei) 是一種潛在的有效策略。臨(lin) 床前動物實驗表明，聯合阻斷CTLA-4和PD-1信號通路可延長B16黑色素瘤模型和K7M2轉移性骨肉瘤模型的動物存活時間，而單獨使用抗體(ti) 阻斷CTLA-4或PD-1則效果有限。而在臨(lin) 床上，PD-1/L1與(yu) CTLA4的抗體(ti) 組合療法也已被廣泛研究及應用，早在2015年，Nivolimab+Ipilimumab的聯合方案即獲美國FDA批準治療黑色素瘤，成為(wei) 上市的雙I-O聯合方案，此後又有多個(ge) 適應症獲批（腎癌、肝癌及結直腸癌等）。

此外，阿斯利康的I藥（Imfinzi）聯合tremelimumab也在不同癌種上獲得了積極的臨(lin) 床效果。此外，國內(nei) 一些藥企也在開展多個(ge) 類似的聯合用藥的臨(lin) 床實驗，如和鉑醫藥就其CTLA4抗體(ti) HBM4003與(yu) 君實生物的PD-1單抗聯合治療方案已經在黑色素瘤，晚期非小細胞肺癌，晚期肝細胞癌，晚期神經內(nei) 分泌瘤/癌以及其它多種實體(ti) 瘤上開展了臨(lin) 床實驗；而祐和醫藥也在前幾日宣布NMPA批準了其在研創新藥抗CD40單抗YH003、抗CTLA-4單抗YH001聯合抗PD-1帕博利珠人源化單克隆抗體(ti) 注射液的一期臨(lin) 床試驗IND申請。

盡管CTLA-4和PD-1/L1聯合使用療法取得了不錯的進展，但在有些臨(lin) 床案例中兩(liang) 者聯合並沒有獲得倍增的療效，反而增加了毒副作用的風險，這既可能取決(jue) 於(yu) 不同的臨(lin) 床方案和病人選擇，也與(yu) 同時使用兩(liang) 種藥物產(chan) 生的雙免疫毒性相關(guan) ，另外聯合使用往往價(jia) 格昂貴，對於(yu) 腫瘤患者來說也是巨大的經濟負擔。為(wei) 了進一步提高療效，減少毒副作用，隨著近年來雙抗技術的發展，同時靶向CTLA4和PD-1/L1的雙抗藥物也在積極的開發中，康方生物的AK104是優(you) 先進入臨(lin) 床試驗的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物，該藥於(yu) 2017年10在澳大利亞(ya) 進入I期臨(lin) 床,在國內(nei) ，去年8月NMPA也授予其新藥上市申請的優(you) 先審評資格，用於(yu) 治療複發或轉移性宮頸癌，有望成為(wei) 一個(ge) 獲得批準上市的CTLA4/PD-1雙特異性抗體(ti) 藥物;而國外藥企阿斯利康開發的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物MEDI5752也緊隨其後，於(yu) 2018年4月在澳大利亞(ya) 進入臨(lin) 床；而康寧傑瑞開發的KN046則是一款同時靶向CTLA-4和PD-L1的雙抗藥物，目前該藥物在澳洲，中國，美國也均已獲批臨(lin) 床試驗，處於(yu) 不同的臨(lin) 床試驗階段。
 

針對CTLA-4&PD-1/L1抗體(ti) 藥物的研發，科佰生物特別開發了CTLA&PD-1/L1雙靶點細胞篩選模型，可從(cong) 細胞水平功能性的測活及評估CTLA4&PD-1/L1聯合用藥以及雙特性抗體(ti) 的藥效，產(chan) 品信息及相關(guan) 數據如下：

PD-1/CTLA4 Dual Effector Reporter Cells CBP74150

PD-L1/CD80&CD86 aAPC Cells CBP74151

Fig 1. The CTLA-4+PD-1 Combination Reporter Assay reflects the mechanism of action of biologics designed to block the PD-1/PD-L1 and CTLA-4/CD80&86 interaction. PD-1/CTLA-4 Dual Effector Cells were incubated with PD-L1/CD80&86 aAPC Cells in the presence of serial titrations of Anti-CTLA-4, Anti-PD-1 or both of the blocking Abs as indicated.

藥物靶點模型

報告基因細胞模型可以很好的反映分子作用機製，同時具備更小的變異性和更好的可操作性，已被中檢院及藥企廣泛應用於(yu) 抗體(ti) 藥物生物活性的檢定，對於(yu) 藥物研發、質量控製、批次放行都有重要意義(yi) 。

科佰生物公司十分重視研發創新，憑借細胞功能改造技術、高精度和靈活的基因編輯工具平台，提供包括激酶，GPCR，免疫治療，耐藥等多類疾病靶點的藥物檢測細胞模型。目前已覆蓋四百多株現貨細胞模型，同時提供高質量的Cell-base生物測活服務。


免疫治療靶點細胞模型

● T Cells Activation Assays (NFAT, IL2, NFkB….)

● Fc Effectors Activity Assays ( ADCC, ADCPs…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Inhibitory Targets (PD-1/PD-L1&2, TIGIT/CD155, CTLA4, LAG3, LILRB4/APOE, CD112R/CD112, SIRPa/CD47, TIM-3, BTLA/HVEM, CD161/CLEC2D, TIGIT&PD-1, LAG3&PD-1, CTLA4&PD-1 Combi…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Stimulatory Targets (OX40, 4-1BB, GITR, CD27, HVEM/LIGHT, CD28…)

● Cytokines and Growth Factor Assays ( BCMA, TGFβ, EGF, CSF1R,IL2, 15, IL4&13, IL6, IL11, IL12, IL23, IL36, IFNs,RANKL…)