針對ctDNA的MRD檢測，你參與了嗎？

MRD是指治療後體(ti) 內(nei) 殘留的腫瘤細胞或者標誌物，通常的翻譯有3種，微小殘留病灶（Minimal Residual Disease）、可檢測殘留病灶（Measurable Residual Disease）、分子殘留病灶（Molecular Residual Disease）。

微小殘留病灶（Minimal Residual Disease）一詞最早是出現在血液瘤中，是指治療後殘留的腫瘤細胞很少，很微小，常規檢測的靈敏度不足以檢測到，一般是由於(yu) 藥物不應答、藥物耐藥等等原因，因此此時MRD的檢測可以是分子檢測（比如NGS），可以是表麵標誌物檢測（比如NGF）。而可檢測殘留病灶（Measurable Residual Disease）則側(ce) 重於(yu) 可檢測到的角度，對殘留病灶的研究限於(yu) 可以檢測到的前提下，而後的分子殘留病灶（Molecular Residual Disease）主要是指分子診斷可以檢測腫瘤的殘留，主要是通過對ctDNA的檢測，這個(ge) 時候適用於(yu) 血液瘤和實體(ti) 瘤。

MRD是腫瘤耐藥、複發的重要因素，是預後判斷的重要指標。在2021年版非小細胞肺癌MRD檢測的專(zhuan) 家共識中，有一段描述：在一項前瞻性多中心研究中，共入組101例帶有體(ti) 細胞突變的早期乳腺癌患者，通過dPCR動態追蹤術後血漿ctDNA，結果提示ctDNA陽性與(yu) 患者疾病複發明確相關(guan) 【風險比HR=25.2，95%可信區間CI 6.7-95.6， p<0.001】，且ctDNA較影像學提前預示疾病複發，中位10.7個(ge) 月（95% CI 8.1-19.1個(ge) 月）。另一項入組130例II-III期結腸癌的多中心隊列研究中，通過多重PCR捕獲的NGS監測患者切除術後ctDNA狀態，結果提示術後30天ctDNA陽性患者複發風險遠高於(yu) 陰性患者（HR=17.5，95% CI 5.4-56.4，p<0.001）。

ctDNA的MDR檢測現狀

現有的針對ctDNA的MRD檢測主要有2條技術路線：tumor-agnostic -assays(腫瘤未知分析)和tumor-informed assays(腫瘤知情/先驗分析)，其中tumor-agnostic -assays僅(jin) 對血漿檢測，利用的是固定的panel（一般為(wei) 驅動基因和靶向藥物基因，也會(hui) 多組學方法）和分析方法對ctDNA做檢測，做分析，代表產(chan) 品Guardant Health公司的Guardant Reveal；tumor-informed assays需要對原發腫瘤組織進行測序（一般為(wei) WES），來鑒定患者的特異基因組變異圖譜，然後再定製個(ge) 性化的panel，針對ctDNA做檢測，也就是說需要對組織和血漿都做檢測，代表產(chan) 品為(wei) Natera公司的Signatera。國內(nei) IVD公司對MRD的檢測，截至發稿前，小編遇到的tumor-informed assays為(wei) 多。

MRD技術難度很大的一個(ge) 方麵是對超低頻突變的檢測能力和穩定性，以非小細胞肺癌為(wei) 例，在早期NSCLC患者血漿中位cfDNA的濃度為(wei) 7.69ng/mL，換算在10mL血漿(20ml全血)中含有大概20,000個(ge) 單倍體(ti) 基因組（3.3pg），考慮到cfDNA建庫時的損耗以及至少存在2條相同的變異基因序列，10mL血漿中ctDNA檢測到的極限分子信號為(wei) 0.02%水平。另外，從(cong) TRACERx研究數據推算，在1cm³體(ti) 積的腫瘤情況下, 10mL血漿中大概含有2條腫瘤來源DNA分子。因此，在NSCLC中進行MRD檢測時，該檢測方法必須可穩定檢測出豐(feng) 度≥ 0.02%的ctDNA。這裏有個(ge) 重要的技術策略，就是Sample Level的策略，對於(yu) site level的0.02%甚至更低，可以通過samples Level來提高靈敏度。

科佰生物

針對ctDNA檢測的MRD診斷IVD的開發，少不了的是性能評價(jia) ，自然也是少不了標準品的開發，科佰生物是一家專(zhuan) 注IVD研發中診斷陽性參考品、檢測限參考品、精密度參考品的研發生產(chan) 型企業(ye) ，針對ctDNA的超低頻標準品的開發，我們(men) 計劃開發2類產(chan) 品（Art-base and Nat-base），希望得到行業(ye) 專(zhuan) 家更多的建議。

針對tumor-agnostic-assays的檢測方法，主要還是滿足不同panel的定製標準品需求，類似與(yu) 液體(ti) 活檢ctDNA標準品的定製，可以針對性的開發針對不同癌種的panel組合，這裏我們(men) 傾(qing) 向納入小panel、中panel、大panel的差異位點合集，同時傾(qing) 向於(yu) 放入致病和疑似致病的位點，組成合集。首要解決(jue) 的問題是超低腫瘤占比帶來的超低頻突變的定標問題，我們(men) 知道dPCR的檢測限一般為(wei) 0.1%，低於(yu) 0.1%的頻率一般很難與(yu) 陰性相區分，因此對於(yu) 超低頻的位點的檢測一般是使用超深度的NGS來定標，除了血液瘤外，國內(nei) 暫時沒有其他腫瘤獲批的MRD檢測試劑盒，很多都是摸著石頭過河的，暫時無法通過上市的超深度的NGS試劑盒來定標，這個(ge) 沒有特別好的解決(jue) 辦法，隻能在混樣的稀釋工藝上，盡可能做到準確和一致。

針對tumor-informed assays的檢測方法，按照工藝上的描述，是定製類的標準品開發，首先針對待測樣本組織開展WES檢測，根據檢測結果設計適合超深度ctDNA檢測的panel，比如捕獲法的話，重點在優(you) 化探針的性能，同時針對已知的突變開發對應的標準品。同樣的，也會(hui) 遇到超低腫瘤占比帶來的超低頻突變的定標問題。在此，科佰生物也是希望能在與(yu) 探針設計合成的公司達成合作，在複發監測的有*效內(nei) ，完成panel的開發和性能評價(jia) 。

MRD檢測意義(yi)

MRD的檢測，針對ctDNA的檢測已經在臨(lin) 床多種腫瘤複發監測中表征出明確的臨(lin) 床檢測意義(yi) ，臨(lin) 床亟待MRD的檢測試劑盒，幫忙指導患者的輔助治療，複發監測。