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【基因編輯產品新品上市】MET Ex14 skipping新添成員

原載自：www.mr-eacltd.com[技術資料頻道] 2023-02-15 瀏覽次數：802

Background

MET受體(ti) 酪氨酸激酶是一種原癌基因，它的異常激活與(yu) 腫瘤發生有關(guan) 。各種潛在的機製，包括轉錄本中的改變、擴增、基因重排和外顯子跳躍，都是MET信號異常的原因。MET導致非小細胞肺癌(NSCLC)的關(guan) 鍵改變之一是MET外顯子14( MET Ex 14)跳躍，這是一種驅動突變，約占肺腺癌的3-4%。MET Ex14跳躍導致功能活躍且穩定的截短受體(ti) 的形成，該受體(ti) 缺乏負責MET泛素化的近膜調節域。至今為(wei) 止全球已經開發了幾種針對MET受體(ti) 的MET激酶抑製劑，其中許多正在進行臨(lin) 床試驗。

MET的結構

MET基因位於(yu) 人類基因組的7q31號染色體(ti) 上，跨越約125kbDNA，包含21個(ge) 外顯子和20個(ge) 內(nei) 含子。MET被編碼為(wei) 前體(ti) ，通過其a和b亞(ya) 基之間的蛋白水解切割被修飾成成熟蛋白質。成熟的MET蛋白由一個(ge) 小的a亞(ya) 基(50kDa)和一個(ge) 較大的b (145kDa)亞(ya) 基組成，通過二硫鍵連接在一起。一個(ge) a亞(ya) 基和b亞(ya) 基的一部分共同構成異二聚體(ti) 蛋白的胞外區，而b亞(ya) 基的其餘(yu) 部分構成跨膜區和胞內(nei) 區。

MET的細胞外成分包含三個(ge) 結構域。N端Sema(Sema-phorin)是最大的結構域，包含500個(ge) 殘基，包含a和b亞(ya) 基的一部分。該結構域對於(yu) MET的配體(ti) 結合、二聚化和激活至關(guan) 重要。Sema結構域之後是叢(cong) 蛋白-信號蛋白-整合素(PSI)結構域，包含四個(ge) 二硫鍵，這對於(yu) 配體(ti) 結合受體(ti) 的正確定位至關(guan) 重要。PSI結構域通過免疫球蛋白-叢(cong) 蛋白-轉錄因子結構域連接到MET的跨膜螺旋。受體(ti) 的細胞內(nei) 部分包括近膜(JM)結構域、酪氨酸激酶(TK)催化結構域和C末端多功能停靠位點。其配體(ti) 肝細胞生長因子(HGF)（也稱為(wei) 分散因子）的結合對於(yu) 激活激酶活性至關(guan) 重要。HGF是迄今為(wei) 止已知的MET受體(ti) 配體(ti) ，並以高親(qin) 和力與(yu) 受體(ti) 結合。

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Fig1.MET蛋白的結構

MET Ex14跳躍的機理

HGF與(yu) MET結合導致受體(ti) 二聚化，導致激酶結構域中細胞內(nei) 殘基Y1234和Y1235自磷酸化，隨後在激酶結構域外的C端磷酸化另外兩(liang) 個(ge) 酪氨酸殘基Y1349和Y1356。C末端殘基的磷酸化導致對接位點的形成，隨後銜接子和效應蛋白，如GRB2（生長因子受體(ti) 結合蛋白2）、GAB1（GRB2相關(guan) 結合蛋白1）和SHC（含Src同源2結構域），與(yu) 停靠位點結合，觸發下遊信號傳(chuan) 導。

2005年報道了NSCLC中MET Ex14的跳躍。內(nei) 含子13的3' 剪接位點或內(nei) 含子14的5 '末端剪接位點的替換或缺失導致MET Ex14跳躍。在MET Ex14的剪接點處或剪接點附近發生的這種體(ti) 細胞改變導致轉錄物中外顯子14的丟(diu) 失和MET蛋白的合成以及JM結構域中47個(ge) 氨基酸的框內(nei) 缺失（包括殘基Y1003)消融CBL介導的受體(ti) 泛素化和降解。因此，MET Ex14跳躍導致MET蛋白水平升高，這可以驅動促進腫瘤發展的下遊信號通路的激活。

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Fig 2. MET Ex14跳躍的機理

MET Ex14跳躍的突變

根據文獻報告，在非小細胞肺癌中常見的導致MET Ex14跳躍的突變有如下幾種：

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Fig 3. 常見導致MET Ex14跳躍的突變

同時在眾(zhong) 多的其他癌種中也發現很多，大約 3–4% 的 NSCLC 具有MET Ex14改變。在組織學亞(ya) 型中， MET Ex14跳躍改變常見於(yu) 肉瘤樣癌 (4.9–31%)，69–72腺鱗癌 (4–8%)、腺癌 (3–4%) 和鱗狀細胞癌 (2%)。此外，在腺癌中，主要的亞(ya) 型是腺泡型 (35-52.9%) 或實性亞(ya) 型 (35.3-53%)。臨(lin) 床上， METEx14跳躍異常多見於(yu) 高齡患者。

MET Ex14跳躍的檢測

一般而言，基於(yu) DNA和RNA的分子檢測是檢測METex14改變的方法。基於(yu) DNA的測序分析可以檢測MET改變，例如剪接位點的插入、缺失、點突變或重複，這些改變可能導致外顯子14跳躍。然而，METEx14跳躍與(yu) 剪接位點中超過120個(ge) 報告的序列變異有關(guan) ，這使得僅(jin) 使用基於(yu) DNA的檢測來檢測這些突變具有挑戰性。因此，對RNA轉錄本的分析可以驗證外顯子13和15之間的融合。在理想情況下，基於(yu) DNA和RNA的檢測可相互補充，以可靠地檢測METEx14改變。

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