ATCC細胞如何培養？

基本原理

 細胞培養(yang) (Cell culture)是模擬機體(ti) 內(nei) 生理條件，將細胞從(cong) 機體(ti) 中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳(chuan) 代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用於(yu) 分子生物學、遺傳(chuan) 學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發展成一種重要生物技術，並取得顯著成就。由體(ti) 內(nei) 直接取出組織或細胞進行培養(yang) 叫原代培養(yang) 。

 體(ti) 外培養(yang) 的原代細胞或星空体育官方网站首页要在體(ti) 外持續地培養(yang) 就必須傳(chuan) 代，以便獲得穩定的星空体育官方网站首页或得到大量的同種細胞，並維持細胞種的延續。培養(yang) 的細胞形成單層匯合以後，由於(yu) 密度過大生存空間不足而引起營養(yang) 枯竭，將培養(yang) 的細胞分散，從(cong) 容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yang) ，即為(wei) 傳(chuan) 代培養(yang) 。

試劑和設備

  細胞懸浮液； 

  6孔平底組織培養(yang) 板，或φ60 mm培養(yang) 皿； 

  18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸於(yu) 75%乙醇中的蓋玻片； 

  含血清培養(yang) 基（通常為(wei) RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青黴素，100μg/ml鏈黴素）； 

  超淨工作台； 

  CO2孵箱； 

  蓋片鑷；

操作步驟

  1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲(si) 綢布擦拭幹淨，不要用紗布； 

  2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yang) 板（每孔一片）或培養(yang) 皿中（每個(ge) 平皿可放置2-3片）； 

  3．在距離紫外燈直射範圍內(nei) 20-30 厘米處照射2-3小時； 

  4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yang) 板中，使蓋玻片*浸在培養(yang) 液中； 

  5．將培養(yang) 板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yang) 板底部2/3麵積時，將培養(yang) 板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

注意事項

  1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法； 

  2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 玻璃製造，並經過鉻酸洗液處理； 

  3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

  4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率； 

  5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。

更多內(nei) 容分享請關(guan) 注我們(men) *哦