關於細胞轉染，你知道多少

細胞轉染定義(yi) ：將外源分子如DNA RNA等導入真核細胞的技術。

瞬時轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體(ti) 中，因此一個(ge) 宿主細胞可存在多個(ge) 拷貝數，產(chan) 生高水平的表達，但通常隻持續幾天，多用於(yu) 啟動子和其他調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染後24-72h內(nei) 分析結果，常常用到一些報告係統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩定轉染：外源DNA既可以整合到宿主染色體(ti) 中，也可能作為(wei) 一種遊離體(ti) 存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體(ti) 中概率很小，通常需要一些選擇性標記反複篩選得到穩定轉染的同源細胞係。

方法及特點:

化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體(ti) 法

物理法：電穿孔法、顯微注射法、biolistic顆粒傳(chuan) 遞法

病毒介導法：逆轉錄病毒、腺病毒

陽離子脂質體(ti) 法：帶正電的脂質體(ti) 與(yu) 核酸帶負電的磷酸基團形成複合物被細胞內(nei) 吞。過程如下圖：

特點：簡單通用，適用性廣，轉染效率高，重複性好，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大。

脂質體(ti) 法由於(yu) 脂質體(ti) 複合物與(yu) 貼壁細胞的接觸機會(hui) 遠大於(yu) 懸浮細胞，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法。

電穿孔法：利用高壓電脈衝(chong) 對細胞膜的幹擾，使其形成利於(yu) 核酸進入的微孔。

特點：需要特定儀(yi) 器，適用性廣，除了質粒外，還可轉染大的基因組，細胞致死率高。

逆轉錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表麵的受體(ti) 相互作用進入宿主細胞，之後反轉錄酶啟動合成DNA並隨機整合到宿主基因組中。

特點：穩定轉染，可用於(yu) 難轉染的細胞、原代細胞，體(ti) 內(nei) 細胞等，但攜帶基因不能太大。

腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表麵的受體(ti) 結合，繼而在αV整合素介導下被細胞內(nei) 吞。

特點：可用於(yu) 難轉染的細胞。

 轉染步驟：DAY-1  鋪板

                 DAY 0  DNA分子與(yu) 複合物混合，轉染細胞

                 After  監測轉染水平                                                                       

影響轉染的因素：

1、血清  血清影響複合物的形成，降低轉染效率

陽離子脂質體(ti) 和DNA的*量在使用血清時會(hui) 有所不同，因此想在轉染培養(yang) 基中加入血清時要進行條件優(you) 化。大部分細胞可以在無血清培養(yang) 基中幾個(ge) 小時內(nei) 保持健康，對於(yu) 對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用OPTI-MEM I培養(yang) 基。對於(yu) 對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用LIPOFECTAMINE 2000。

2、抗生素  比如青黴素和鏈黴素，是影響轉染的培養(yang) 基添加物。這些抗生素一般對於(yu) 真核細胞無毒，但陽離子脂質體(ti) 試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。

3、細胞代數  轉染前細胞經過1-2次傳(chuan) 代保證細胞生長旺盛容易轉染，注意貼壁細胞一旦長滿就不好轉染。

4、細胞鋪板密度  一般轉染時，貼壁細胞密度為(wei) 70%-90%，懸浮細胞密度為(wei) 2*10^6--4*10^6細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處於(yu) 靜止期。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chan) 量。

5、DNA質量  DNA質量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術基於(yu) 電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物汙染都會(hui) 顯著影響轉染複合物的有效形成和轉染的進行。