ATCC細胞的複蘇事項可要看好了！

　　ATCC細胞複蘇的原則：

　　在實際操作中，凍存細胞要進行複蘇，再培養傳代。複蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內，再次形成胞內結晶損傷細胞。

　　ATCC細胞的複蘇事項：

　　1.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例，配置相應的*培養基，確保細胞培養條件與說明書一致。若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題，應自行承擔。每株細胞2支凍存管複蘇時建議先隻複蘇一支，若複蘇出現問題請及時與廠家取得聯係。

　　2.取出凍存管，浸入37溫水浴中，並不時搖動令其盡快融化，注意管口不要沒入水麵以下，以免造成汙染。

　　3.從37水浴中取出凍存管，用75%酒精擦拭凍存管表麵，放入超淨台內。吸出細胞懸液，轉移至培養瓶內，補加6-8mL培養液，37溫箱靜置培養，隔天換新鮮培養液，以去除DMSO，或者複蘇當時離心去除DMSO，並在顯微鏡下觀察細胞狀態和密度；對於貼壁展開較慢的細胞，建議複蘇當時去除DMSO，待細胞貼壁展開後再換液（原代細胞：細胞懸液離心後觀察管底沉澱初步判斷細胞量，後行台盼藍染色以確定細胞存活率；接種後隔天觀察細胞貼壁量，以判定細胞貼壁率）。

　　4.貼壁細胞

　　過夜培養後多數細胞會重新貼壁，待匯合度80%左右時正常傳代。若細胞仍不能貼壁，請用台盼藍染色法鑒定細胞活力。如台盼藍染色證實細胞活力正常則1000rpm離心3-5min收集細胞，用新鮮培養基重懸後移回培養瓶內重新貼壁培養。

　　5.懸浮細胞

　　過夜培養後多數細胞會逐漸恢複活力，有光澤、飽滿。若細胞光澤暗淡，用台盼藍染色法鑒定細胞活力。

　　6.建議在收到細胞後每天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便於菌種的查詢。

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