星空体育官方网站首页的篩選實驗原理解析

　　星空体育官方网站首页購買就選科佰！外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩定表達。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常隻持續幾天。後者外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩定星空体育官方网站首页，一般是根據不同基因載體中所含有的抗性標誌選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標記基因有潮黴素（hygromycin）、新黴素（neomycin）和嘌呤黴素（puromycin），常用Hygromycin B、G418和puromycin進行選擇性篩選。傳統的穩定株篩選方法需要通過外源基因的瞬時轉染後對靶細胞進行篩選，終獲得從單一細胞擴增起來的穩定星空体育官方网站首页，該方法陽性率低，周期長，工作量大。慢病毒是一種RNA病毒，攜帶的外源基因在病毒感染細胞後需要逆轉錄為DNA，再整合到宿主細胞基因組以後才能表達。利用慢病毒必須整合到宿主基因組的特性來篩選穩定株的方法克服了傳統方法的弊端，可以在短時間內獲得率的穩定星空体育官方网站首页。篩選得到的細胞或者可穩定表達目的蛋白，用於蛋白的擴增和富集；或者得到穩定沉默特定基因的星空体育官方网站首页。

　　篩選穩定星空体育官方网站首页時出現的問題及其解決辦法：

　　做hela細胞的篩選，現在已經篩選穩定星空体育官方网站首页3周，在6孔板中已經長出一些細胞簇，想把它挑到96孔板中，就用2ul胰酶消化，在消化過程中，胰酶擴散，細胞已經四散開，和周圍的其它細胞簇融合在一起(我的細胞簇離的很近)，就是說幾個細胞簇被胰酶融合在一起，那樣根本沒有辦法做下去了，該怎麽辦？

　　1.可以減少胰酶量;胰酶在加入之前要用37度溫箱預熱，並且PBS潤洗細胞層，以減少可能殘存的血清的影響；

　　2.加入胰酶後，稍過幾秒鍾就可以吸走消化液了，不用吸幹淨，然後放到37度溫箱中繼續作用1MIN，這時，消化酶可以繼續作用的，又可避免胰酶擴散；

　　3.顯微鏡下觀察細胞*鬆散開，就可以在局部加培養基，並被吸走了；

　　4.具體消化的時間，注意摸索，如果在步驟b中顯微鏡下見細胞尚未*鬆散開，可以再重複的，直到鬆散開，能夠被吸走為止。

　　建議：

　　1.在100mm dish中挑克隆，細胞分的稀一點。

　　2.把細胞全部消化下來，在96孔板中逐步稀釋篩選穩定星空体育官方网站首页。

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