服務原理

慢病毒載體(ti) (Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體(ti) 係統，它能高效的將目的基因(或RNAi)導入動物和人的原代細胞或細胞係。慢病毒載體(ti) 基因組是正鏈RNA，其基因組進入細胞後，在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為(wei) DNA，形成DNA整合前複合體(ti) ，進入細胞核後，DNA整合到細胞基因組中。整合後的DNA轉錄mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白;或產(chan) 生RNAi幹擾。

慢病毒載體(ti) 介導的基因表達或RNAi幹擾作用持續且穩定，原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中，並隨細胞基因組的分裂而分裂。另外，慢病毒載體(ti) 能有效感染並整合到非分裂細胞中。以上特性使慢病毒載體(ti) 與(yu) 其它病毒載體(ti) 相比，比如不整合的腺病毒載體(ti) 、整合率低的腺相關(guan) 病毒載體(ti) 、隻整合分裂細胞的傳(chuan) 統逆轉錄病毒載體(ti) ，有鮮明的特色。大量文獻研究表明，慢病毒載體(ti) 介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝髒、肌肉、視網膜、造血幹細胞、骨髓間充質幹細胞、巨噬細胞等。

慢病毒載體(ti) 不表達任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位無細胞免疫反應，體(ti) 液免疫反應也較低，不影響病毒載體(ti) 的第2次注射。

服務簡介

慢病毒( Lentivirus)屬於(yu) 逆轉錄病毒科(Retroviridae)，為(wei) RNA病毒，如人免疫缺陷病毒(HIV)、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由於(yu) 對HIV-1的研究*泛最深入，對其生物學特性最為(wei) 了解，因此HIV-1來源的慢病毒載體(ti) 已成為(wei) 其中的代表。

HIV-1為(wei) 雙鏈RNA病毒，共有9個(ge) 基因，如圖1所示。gag、pol、env3個(ge) 基因編碼病毒的基本結構，tat、rev為(wei) 調節基因，vif、vpr、vpu、nef 4個(ge) 為(wei) 輔助基因。其中，gag基因編碼病毒的核心蛋白，包括基質蛋白、衣殼蛋白、核衣殼蛋白;pol基因編碼病毒複製所需的酶，如反轉錄酶、整合酶、蛋白酶，env基因編碼病毒的包膜糖蛋白，決(jue) 定病毒感染宿主的靶向性。rev編碼的蛋白調節gag、pol、env的表達水平，tat編碼的蛋白參與(yu) RNA轉錄的控製。4個(ge) 輔助基因編碼的蛋白則作為(wei) 毒力因子參與(yu) 宿主細胞的識別和感染。兩(liang) 端為(wei) 長末端重複序列(LTR)，內(nei) 含複製所需的順式作用元件，如包裝信號元件Ψ。

第一代慢病毒載體(ti) 係統是以三質粒係統為(wei) 代表，該係統由包裝質粒、包膜質粒及載體(ti) 質粒3種質粒組成。包裝質粒是HIV-1前病毒基因組5’端LTR由巨細胞病毒早期啟動子取代，3’LTR由SV40 polyA序列取代。包裝成分分別構建在兩(liang) 個(ge) 質粒上，一個(ge) 表達gag和pol，另一個(ge) 表達env。載體(ti) 質粒攜帶了5’端LTR，和全部5’端非翻譯區域，另外還帶有rev應答元件(RRE)。包膜表達質粒使用水皰性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用來代替了原病毒的env基因。

第二代慢病毒載體(ti) 係統是在第一代的基礎上進行改進，在包裝質粒中刪除了HIV的所有輔助基因(vif、vpr、vpu和nef基因)。這些附屬基因的去除並不影響病毒的滴度和感染能力，同時增加了載體(ti) 的安全性。

第三代慢病毒載體(ti) 係統由四質粒代替原有的三質粒包裝係統。將rev基因單獨放在一個(ge) 包裝質粒上。同時又增加了兩(liang) 個(ge) 安全特性：一是構建自身失活的慢病毒載體(ti) ，即刪除了U3區的3′LTR，使載體(ti) 失去HIV-1增強子及啟動子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出RNA;二是去除了tat基因，用異源啟動子序列代替，這樣原始的HIV-1基因組中的9個(ge) 慢病毒載體(ti) 中隻保留了3個(ge) (gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒載體(ti) 係統更加安全。

服務優(you) 勢

·能將外源基因有效整合入宿主染色體(ti) ，外源基因表達水平較高、表達穩定;

·廣泛的宿主，可感染分裂和不分裂的細胞，幾乎可以感染所有類型的細胞，特別適合質粒載體(ti) 轉染效率低的細胞;

·適用範圍廣，可用於(yu) 體(ti) 外細胞係和活體(ti) 動物模型，研究基因和RNAi等;

·轉導效率高，不需要轉染試劑，目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加。

科佰生物擁有豐(feng) 富的病毒包裝經驗，成功為(wei) 很多客戶包裝出需要的病毒，並且完成相應的功能檢測。

服務流程：

1）獲得目的基因序列;

2）構建慢病毒載體(ti) ;

3）重組質粒和包裝質粒共轉，包裝病毒;

4）病毒純化、濃縮;

5）滴度測定。

6）對照組和實驗組感染細胞，利用抗生素篩選，得到穩定單克隆星空体育官方网站首页(可選)。

案例展示

服務說明

1）客戶提供目的基因的序列，如果提供模板，請告知載體(ti) 、酶切穩點等信息;

2）若實驗材料為(wei) 原代細胞或者特殊培養(yang) 的細胞，請先谘詢;

3）公司默認提供病毒滴度為(wei) 1x107-1x108TU/ml,規格1ml;

4）目的蛋白的功能驗證另外收費。